前 言
目前，皮肤癣菌病在人群中较为多发，尤其以热带地区为主，皮肤癣菌病的发病率仅次于皮炎、湿疹，而在感染性皮肤病中癣的发病人数及发病率皆居于首位。总的来说，癣病具有如下特点：1、感染率极高，如足癣，有调查显示足癣在我国南方地区的患病率高达 50%~60%[1]；2、传染性强：在不对癣病做任何治疗时，它会扩大感染范围，具有自身传染及交叉传染性；3、季节性明显：皮肤癣菌病有季节性，温暖潮湿的夏季是癣菌增长的温床，此时，癣菌病人症状会加重，而冬天时候症状会减轻；4、极易复发：皮肤癣菌病在得到治疗以后，较为容易在相同的部位相同的时节重复发作。
同时，皮肤癣菌病对于人体的危害也是极大的：如 1、全身损害，皮肤有渗出液、皮肤潮红；有皮肤鳞屑脱落，病人可能会有头痛发烧、淋巴结肿大等症状。2、脏器损害，癣病发生时会损害肝肾功能，也有可能产生继发性感染继而导致全身电解质失衡、或脏器衰竭而危及自身生命。3、关节损害，患者会出现类风湿性关节炎、关节强直、疼痛变形等症状。4、营养缺失，长期的大量鳞屑的脱落，构成皮肤的蛋白质、维生素及叶酸等物质随之丢失。若皮损迁延多年不愈且泛发全身会导致低蛋白血症或营养不良性贫血。造成患者免疫力低下，临床表现为乏力、倦怠、面色苍白、易于感冒等症状。5、继发感染，患者皮肤被损坏的面积过大，此时细菌就会趁虚而入，继而全身感染或脏器衰竭而死亡。
在我国，患癣病的人数以亿计，鉴于癣菌病危害如此严重，故积极防治皮肤癣菌病具有重要的临床意义和社会意义。然而，根据现代临床研究，采用化学药物来治疗皮肤癣菌病有易复发、伤皮肤等弊端，而中药中早有古方记载，如《仲景癣方》、《神坊草本》等古方记载的共有药物如蛇床子、苦参、地肤子等来治疗皮肤癣菌病收到了良好的治疗效果。而艾叶作为我国民间最常用的一味中药，具有温经止血，散寒止痛，外用祛湿止痒的功效。故本研究拟采用蕲艾、蛇床子、苦参、地肤子中的活性成分加以复配而成一款具有预防及治疗癣菌病的纯中药制剂—艾参露。即对蕲艾、蛇床子、苦参、地肤子中有效活性成分的提取工艺进行了筛选，将提取物与乳化剂复配成艾参露之后，再对艾参露的质量标准及初步药效学进行了研究，为艾参露的进一步应用奠定科学基础。
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第一章 艾参露各单味药提取物的提取工艺研究
众所周知，考察多种因素、多个水平及其交互影响是在进行提取物提取工艺筛选时候所必须做的，因为只有这样才能得出最佳的工艺参数。国内外学者在进行工艺优化设计时常使用正交设计，其优点是效率高、经济实惠，但实验精密度低、建立的线性数学模型拟合相关系数低、预测性较差。与正交设计相比，响应曲面设计方法(Response Surface MethodologyRSM) 是通过一系列确定性实验，二次函数表达式是通过非线性的回归方程建立起来的，试验点的选取较正交设计更为合理。Box-Behnkendesign(BBD)和中心组合设计（CCD）是其中最常用的两种实验设计方法，它们的区别最主要在于选点方法的不同。当实验中有着连续的变量，并且因素较多的时候，我们常用 CCD 法，当实验中因素和水平较少，我们常用BBD 法。本研究以各单味药活性部位为目的，根据其活性成分的理化性质，采用加热回流法提取，对其影响因素进行考察，本研究采取 BBD 法优化了艾参露中各单味药药材的提取工艺，为中药资源的合理利用和工业化大生产奠定基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器
紫外-可见分光光度计，产自上海美谱达仪器有限公司 UV-3200 型；超声波清洗器，产自熊猫集团南京电子计量有限公司 UP5200H 型；旋转蒸发仪，产自上海亚荣仪器有限公司 RE-52A 型；北京赛多利斯天平有限公司生产的绝对精度 d=0.01mg 的分析天平；电子天平，产自北京赛多利斯天平有限公司 ALC-210.2 型，绝对精度 d=0.01g；水浴锅，产自天津泰斯特有限公司 XMTD-2M 型。
1.2 试药
蕲艾：2014 年 6 月采自湖北蕲春县张榜镇，由湖北中医药大学胡志刚副教授鉴定为菊科植物蕲艾 Artemisia argyi Levl.et Van.var.argyi cv.Qiai 的干燥叶。
蛇床子：2014 年 02 月于华润新龙医药有限公司购买，安徽产，生产年月 2013 年 11 月，由湖北中医药大学胡志刚副教授鉴定为伞形科蛇床属植物蛇床 Cnidium monnieri(L.)Cuss 的干燥成熟果实。
苦参：2014 年 02 月于湖北省中药材公司购买，安徽产，生产年月 2013年 12 月，由湖北中医药大学胡志刚副教授鉴定为豆科植物苦参 SopHoraflavescens Ait.的干燥根。
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2 方法与结果
2.1 蕲艾提取工艺研究
蕲艾的主要活性成分是挥发性成分及黄酮类化合物，其次就是苯丙素类的绿原酸，绿原酸有抗菌抗炎作用。本试验以提取蕲艾中绿原酸为目的，通过单因素试验确定乙醇浓度、提取温度、料液比等各因素的条件范围。在单因素基础上，通过 Box-Behnken design(BBD)设计响应面法优化蕲艾中绿原酸的最佳提取工艺。
2.1.1 绿原酸标准曲线的绘制
根据回归方程，变量曲面图是根据拟合的目标函数为数学模型的，即图 2~图 4，根据拟合的响应曲面多形状，分析乙醇浓度、提取温度、料液比对总绿原酸提取率的影响。结果预测总绿原酸提取率的综合评分最大值为 0.9136，最优工艺为：乙醇浓度（水平+0.697）为 88.94%，提取温度（水平-0.549）为 61.275℃，料液比（水平+0.688）为 1：18.44。
验证实验是根据响应面曲线得出的最优工艺来展开的，结合实际的生产情况，将各因素条件进行取整，最佳乙醇浓度为 89%，最佳提取温度为61℃，最佳料液比为 1：18。实际总绿原酸提取率的综合评分为 0.9256（n=3），实际值比预测值高 1.31%，验证实验的结果显示实验模型对工艺具有很好的预测性，得出的最优工艺稳定性好，重现性佳。
香豆素类、挥发油类和萜类三种化合物是蛇床子中的主要化学成分，其中总香豆素类化合物是蛇床子中最重要的有效成分。本试验以提取蛇床子总香豆素类成分为目的，通过预试验确定乙醇浓度、提取时间、料液比等各因素的条件范围，通过 BBD 法得出最佳提取工艺。
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第三章 艾参露的质量标准研究...............................32
第一节 艾参露的薄层色谱鉴别.................................32
1 仪器与试药 ..............................................32
2 方法与结果 ............................................33
第二节 艾参露中绿原酸和蛇床子素的含量测定.................41
第四章 艾参露的初步药效学研究..............................62
1 仪器与材料 ..............................................62
2 方法与结果 ...............................................62
结语与创新 .................................................64
第四章 艾参露的初步药效学研究
本实验拟采用菌落计数法研究艾参露对红色毛癣菌、石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌三种真菌的生长抑制效果。
1 仪器与材料
1.1 仪器：电热恒温鼓风干燥箱(GZX-9140MBE)上海搏迅实业有限公司医疗设备厂、洁净工作台(洁净等级 100 级)上海搏迅实业有限公司医疗设备厂、真菌培养箱、立式压力蒸汽灭菌器(LD2X-30KBS)上海申安医疗器械厂。
1.2 材料 菌种：红色毛癣菌 (ATCC 28188)、石膏样小孢子菌（NRR00150）、絮状表皮癣菌（CCCCHE1C) ，以上菌株均购自中科院南京皮肤病研究所医学真菌保存中心。
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2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 菌液的制备 取适量的三种菌种分别接种于 100mL 的沙氏葡萄糖液体培养基中，置于 25℃的真菌培养箱中连续培养 20 天后取出，滤去菌丝，取 10mL 滤液进行离心机离心，分别稀释一定的倍数，分别得到含孢子数1000 个/mL 的三种菌液。
2.1.2 实验组细菌药物混合液的制备 分别将 2mL 的三种细菌液与 2mL 的艾参露原液进行混合后，置于无菌试管中，同时配制 10 组，待用。
2.1.3 菌种的培养 将处理得到的实验组和对照组分别加入到无菌的培养皿中，向其中加入融化并且快变冷的沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂(SDA)，混匀后在 25℃的真菌培养箱中连续培养 15 天，此时利用菌落计数法做平板菌落计数，得出实验组和对照组的菌落平均数。
2.2 结果 实验结果表明，实验组（即添加了艾参露原液的菌液）中的三种菌落数明显低于对照组（以生理盐水代替艾参露的菌液）中的三种菌落数目。表明艾参露对红色毛癣菌、石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌的生长繁殖具有明显的抑制效果。
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结语与创新
本研究课题的目的在于运用我国丰富多样的中药资源来开发出一款起效快、无毒副作用、药效持久的纯中药制剂。本研究在经历了前期的筛选之后，从众多具有抗菌作用的中药中选取了四种从古至今最为常用且抗菌效果最好的四味中药，即以蕲艾、蛇床子、苦参、地肤子为原药材，经过科学的提取方法筛选出其活性成分的最佳提取工艺，并进一步复配成艾参露制剂。本研究以艾参露为研究对象，进而对其质量标准和初步药效学进行了研究，为艾参露的进一步应用提供一定的科学依据。本研究课题的创新性如下：
1、首次选用蕲艾、蛇床子、苦参、地肤子作为原药材，运用其提取物复配成具有明显的抗真菌消炎的液体制剂—艾参露。
2、首次采用 Box-Behnken design(BBD)设计响应面法优化艾参露各单味药提取物的提取工艺，为实现中药资源的最大化利用提供依据。
3、首次运用多指标来控制艾参露的质量，如运用齐墩果酸-熊果酸的原位预处理方法在 TLC 中分离齐墩果酸及熊果酸，运用 HPLC 在同一条件下测出绿原酸和蛇床子素的含量，利用了 GC-MS 结合内标测定法测定出了艾参露中桉油精的含量。
4、首次对艾参露的进行了初步药效学研究，采用菌落计数法以红色毛癣菌、石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌为研究对象，实验结果表明艾参露对红色毛癣菌、石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌的生长有明显的抑制作用。
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参考文献（略）