引言
茯苓为多孔菌科真菌茯苓coccw (Schw.) Wolf的干燥菌核。茯苓性平，味甘、淡。归肺、胃、肾经。具有利水渗湿，健脾化痰，宁心安神的功能。用于水肿尿少、脾虚食少、便溏泄湾、心神不安、惊淨失眠等病症的治疗。获苓全身是宝，根据药用部位的不同，茯苓分为五种不同的药用部位。依据传统中医药理论及茯苓的传统加工方法，将新鲜获苓个经发汗、蒸煮或冷冻后切下或剥下的黑色外皮称“获苓皮”，利水消肿功效最佳，常用于水肿尿少、水湿停滞症。获苓皮层以内的带色部分，削下切片干燥即为“赤茯苓”，长于渗利湿热。将菌核内部白色部分切薄片或小方块，即为“白茯苓、获苓块、茯苓丁”，擅长健脾益气，多用于那些久病虚弱、脾虚食少的病人。获苓药材中带有松根的部分，即为“获神"，茯神药材价格最高，白茯苓次之，去掉茯苓肉的松根即为“神木"。茯神宁心安神力量最强，用于失眠多梦、虚烦健忘等症。还有全茯苓个直接切片等。实验表明，不同产地、不同部位的获苓中化学成份含量不尽相同，其药理作用、临床疗效存在差别。
茯苓作为一味传统、大宗常用中药材，始载于《神农本草经》并被列为上品，茯苓药性缓和，补而不峻，利而不猛，既能扶正又能祛邪，为药食两用中药材，有十方九苳之说，年需求量35000~40000吨。茯苓野生资源很少，不易发现和采挖，全国有近20个省栽培茯苓，但茯苓主要产于安徽、湖北、湖南、云南、贵州、四川等省，传统上以云茯质量最好，安徽茯苓次之，湖南、贵州茯苓再次之，广东、广西茯苓更次之，这些，都是以外观性状作为茯苓药材的质量标准，茯苓多糖含量高，但P-茯苓聚糖不溶于水，水浸出物、醇浸出物、茯苓酸和茯苓酸A含量与茯苓外观性状的好坏成反比，如何综合评价茯苓药材质量是一项复杂的社会工程，需要获得国家药典委员会等有关专家、部门的广泛认同和各方面的认可。
调查中，我们发现由于松树资源及砍伐指标受限制，各茯苓主产地种植夜等的投入、产出比不高，种植规模逐年下降，茯苓需求量越来越大，主产地越来越分散、转移，获茶栽培、加工中还存在很多问题，如茯苓菌种来源、质量没有统一的质量标准，特别是大量使用的稻草、据木屑茯苓菌种质量最差，种植茯苓大量消耗松木资源，栽培技术粗泛、落后，代料、袋料栽培难以普及、推广，成本过高，不如种植灵芝、香薛等食用菌的经济效益高，茯苓加工以手工为主，需发汗处理，现普遍釆用蒸煮法代替传统发汗处理，冷冻削皮难以普及、推广，需要大冷库。
茯苓药材在发汗过程中易变质、浸染、腐烂、串色，刚挖的茯苓含水量大，又不能干燥，几天就长霉，以白霉为主，再进一步就长杂菌。发汗过程中白茯苓染色变赤茯苓，使白茯苓与赤茯苓很难完全分开；白茯苓价格高，赤茯苓价格低，使产值、效益明显降低；茯苓皮临床用量很少，大部分当成废料处理，没有得到大量的综合开发利用，造成原料的极大浪费，而茯苓皮含30%左右的茯苓聚糖，机械剥皮的更高，三蔽的含量比茯苓药材高。2010版《中国药典》对茯苓和茯苓皮仅有理化、薄层等方法的鉴别。指标性成分的含量测定还未确定。指纹图谱的发展对中药材质量鉴定的改革创新具有重要指导意义。因此，开展对茯苓不同部位的质量标准研究，制订茯苓药材商品规格标准和质量标准体系，对夜苳的规范化栽培及茯苓的开发利用有重大意义。鉴于此，湖南省中医药研究院担任国家“十二五”科技支撑计划课题“玉竹、茯苓等规范化种植及其SOP优化升级研宄”的茯苓子课题的研究，在此基础上进行本论文的实验研究。
本课题研究内容主要从茯苓药材的主要药理活性成分着手，通过对不同部位、不同产地茯苓药材质量综合评价研究，釆用多种检测手段、分析方法，测定不同部位、不同产地茯苓有效成分及含量的差异，寻找茯苓药材质量控制指标成分，构建茯苓药材不同部位、不同产地质量标准及有效成分组群的指纹图谱。通过对茯苓药材的质量较系统的研究，为我国茯苓药材规范化种植及其SOP优化升级提供质量标准，制订各种技术操作规范和质量标准，使茯苓药材栽培规模化、规范化，质量可控、稳定。
第一部分茯苓药材与相关对照品的收集
茯苓野生资源很少，目前我国茯苓药材以人工种植为主，我国最主要的夜等产地以安徽、湖北和湖南为主。本课题主要对茯苓不同药用部位、不同产地进行比较研究，经大量文献调研，样品釆集地主要选择安徽、湖北、湖南等茯苓主产地，并尽可能收集八个主产省份的部分茯苓样品作为补充，由于各种原因，样品采集过程中未能达到均勾、大数据采集各省、各地的茯苓样品。A-D分别代表茯苓不同部位。1 一23分别代表不同的产地。见表1。
第二部分茯苓不同部位多糖含量比较研究
1实验仪器与试药
岛津UV-1601紫外分光光度计；T-214型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；WND-200型高速中药粉碎机（浙江省兰溪市伟能达电器有限公司）。葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110833-201205)。所用的苯酷，浓硫酸试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。水为双重蒸馆水。
苯酌试剂的制备：称取苯酌5 g于100 mL棕色容量瓶中，加水溶解至刻度，即得5%苯酷试液。
对照品溶液的制备：精密称取经105 °C干燥至恒重的葡萄糖对照品41.3 mg,置100 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勾，既得。
2提取方法
取茯苓药材粉末(过80目蹄)约0.1 g，精密称定，置圆底烧瓶中，用80%乙醇150 ml回流提取1 h,趁热滤过，残渣用80%的热乙醇洗潘2次，每次10 ml，将残澄及滤纸置烧瓶中，精密加入lmol‘I/iNaOH溶液150 ml,室温放置8 h,滤过，置250 ml容量瓶中，残渣及烧瓶用热水洗漆2次，每次10 ml,合并滤液与洗液，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。
3吸收波长的选择
精密吸取葡萄糖对照品溶液和供试品溶液各0.5 mL,置25 ml具塞刻度试管中，加水至2.5 ml，加入5.0%苯酌水溶液6.0 ml，在冰水浴中缓缓加入浓硫酸至刻度，摇勾，冰水浴中放冷后置沸水浴中10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min，取出，放置至室温，隨行溶剂空白，在300-700 mn波长处扫描，二者均在489 nm处有最大吸收值，故选择489 nm为测定波长。
精密吸取供试品溶液0.5 mL置25 ml具塞刻度试管中，加水至2.5 ml,加入5.0%苯酷水溶液6.0 mL，在冰水浴中缓缓加入浓硫酸至刻度，摇勾，放冷后置沸水浴中10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min，取出，放置至室温，随行溶剂空白，分别在30 min、45 min、60 min、75 min、90min测定吸收度，其RSD为0.98%。结果表明供试品溶液在90 min内基本稳定。
分别取同一葡萄糖对照品溶液，精密吸取0.5 mL，5份，置25 ml具塞刻度试管中，加水至2.5 ml，加入5.0%苯酷水溶液6.0 mL，在冰水浴中缓缓加入浓硫酸至刻度，摇勾，放冷后置沸水浴中10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min,取出，放置至室温，随行溶剂空白，测定吸收度。其结果RSD为0. 20%。表明仪器的精密度良好。
第三部分茯苓不同药用部位三萜类成分含量比较研究...24
第一节茯苓不同药用部位茯苓酸含量比较研究...........24
1实验仪器与试药...........................24
2方法与结果...........................24
3讨论...........................30
第四部分茯苓不同药用部位指纹图谱研究...........39
第一节茯苓皮指纹图谱...........................39
1材料...........................39
2方法与结果...........................40
3讨论...........................48
第五部分总结与展望...........................71
1总结...........................71
2应用与展望...........................74
第四部分茯苓不同药用部位指纹图谱研究
第一节茯等皮指纹图谱
1材料
1.1仪器
Agilent 1260型液相色谱仪，DAD检测器，含在线真空脱气机、四元梯度泉、柱温箱（美国Agilent公司）；色谱数据的采集与处理由Agilent化学工作站完成；超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；T-214型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。
1.2试剂
茯苓酸A对照品（成都克洛玛有限公司，批号：140213)；甲醇、隣酸、乙腈（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；水为超纯水。
1.3药材
本实验所用茯苓皮药材经湖南省中医药研究院中药研究所谢昭明研究员鉴定为多孔菌科真菌茯苓Pona COCOS (Schw.) Wolf干燥菌核的黑色外皮。
取经105°C干燥至恒重的茯苓酸A对照品约7mg，茯苓酸约7mg，茯等新酸B约6mg，松龄新酸约6 mg，精密称重，分别置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇勾，即得对照品储备液。依次精密吸取上述储备液6.00、4.00、7.00、S.OOmL,置同一25 mL容量瓶中，摇勾，制成混合对照品溶液。
取夜苳皮药材粉末(过80目蹄)约1 g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取50 ml甲醇，称定重量，超声提取20min，冷却至室温，补足损失的甲醇量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0.45^1111)滤过，即得。
根据18批不同产地赤茯等药材供试品溶液色谱图提供的相关数据，确定16个特征共有峰，建立了获薈药材三蔽类成分的指纹图谱(图8)。通过比较19批茯苓样品的色谱图，发现7号峰的峰面积较大，峰位居中且18批样品中稳定存在，故选其为参照峰。将其他各共有峰的相对保留时间和相对峰面积与7号峰比对。结果显示，各个共有峰的相对保留时间的RSD均<3.0%，但各个共有峰的相对峰面积的RSD有很大的差异，其中以峰1, 5，8，15, 16所代表成分最为明显，说明在不同产地茯等皮样品中这5个色谱峰所代表的成分的含量存在较大差异。
第五部分总结与展望
1总结
茯苓是一味药食两用的大宗常用药，其味甘、淡。具有利水渗湿，健脾化痰，宁心安神的功效。用于治疗脾虚水肿、便溏泄湾、惊悸失眠等病症。中药是中医防病治病的物质基础，其质量直接影响临床疗效。本文从茯苓药材主要药理活性成分着手，通过对不同部位、不同产地茯苓药材的比较研宄，采用多种检测手段、分析方法，测定不同部位、不同产地茯苓中茯苓多糖和茯苓酸、夜苳酸A含量的差异，构建了茯苓药材不同药用部位有效成分组群的指纹图谱。通过对茯莘药材的质量较系统的研究，为我国夜等药材规范化种植及其SOP优化升级提供质量标准，为临床安全用药奠定坚实的基础。
本文主要研究结果及成果如下：
1首次试图对不同药用部位茯等的主要药效成分进行含量测定，建立茯苓药材的质量标准和客观评价指标，揭示茯苓药材外观性状、商品等级与茯苓药材内在质量的关系与相关性，茯苓多糖含量比较结果发现：白茯苓>赤茯苓>茯茶皮，茯苓酸和茯苓酸A含量比较结果显示茯苓皮>赤茯苓>白茯等。茯苓酸和茯苓酸A同为四环三蔽类化合物，而四环三蔽类成分是茯苓药材发挥利尿功效的主要活性成分，因此茯茶皮中茯苓酸和茯等酸A含量高与茯苓皮临床上利水消肿功效最佳有一定的相关性，茯苓多糖具有提高免疫力、保肝的药理作用，而白茯苓中茯等多糖含量最高，这与获等长于健脾益气的功效相吻合。通过比较茯苓不同部位药效活性成分含量，为获等不同药用部位临床区别用药提供了理论基础。并且为茯苓的物质基础和作用机理的基础的深化研宄提供了可靠的实验数据和新的方向。
参考文献（略）