引言
银屑病属于中医"白沱"之范畴，是一种常见的慢性红斑鳞屑性皮肤病。本病病因众多，发病机制较为复杂，病情缠绵，易于复发，对患者的身心健康产生了严重的影响。
银屑病是以丘疹、红斑为基拙，表面覆盖灰白色鳞屑且剥脱后有点状出血为皮损特点。其生理病理的重要特点是角质形成细胞增殖与分化异常，有丝分裂周期缩短，表皮通过时间缩短，其组织病理的主要表现是：角质形成细胞增殖过度、角化不全伴角化过度、颗粒层消失、棘细胞层增厚、炎症细胞浸润、真皮内毛细血管扩张等。银屑病的发病机制涉及免疫、炎症、细胞增殖与调亡、遗传等多种因素。
目前关于《艮屑病发病机制的研究，都围绕着角质形成细胞剧烈增殖和调控机制来展开。由此可知，探讨药物治疗银屑病的一个重点方面即是研究能够抑制角质形成细胞过度增殖的药物。作为银屑病治疗的重要手段之一，外用药物能协助稳定病情、缩短病程、减少系统用药所引起的副反应，因此合理运用外用药物来治疗银屑病，尽管不能从根本上治愈，但能获得较长的缓解期，在一定程度上能减少患者的心理压力并改善其社会生活盾量。临床上，中药外用治银屑病获得了确切的疗效和病患的肯定，与西医外用药物相比，前者不仅有较少的不良反应，而且不易使旧皮损复发，因而具有举足轻重的治优势。近年来药物透皮技术的革新也为中药外治的发展提供了更高端的平台。随着现代理化技术研究手段的不断更新，并结合中药的深次分析，中药有效成分的分离鉴定更加细微透彻，药理作用更加明确。
故本课题首先从银屑病的临床及实验研究文献中筛选出对改善银屑病皮损效显著且使用频次较高的中药，然后运用体外细胞培养技术通过分离银屑病人血清免疫球蛋白及外周血单一核细胞对角质形成细胞进行处理，最后采用4-甲基偶氮嗤蓝比色法（MTT法）测定中药对角质形成细包增殖的影响卜且进行——对比，进而筛选出抑制作用最强的中药。通过临床实验报道药效篩选-临床验证"的模式，从细胞层面阐述中药治疗银屑病的作用机制，为临床外用中药治疗银屑病提供可靠的实验依据。
第一部分：药物初筛和制备
一、中药外用制剂治疗银屑病的文献初筛
方法：本研究通过查阅数篇研究银屑病中药外用制剂的文献，按出现频次大小，对500余种中药进行筛选。
结果：改善银屑病皮损疗效显著且使用频次排在前10位的中药及其频次为：苦参68次、黄柏65次、丹参47次、大黄46次、徐长卿41次、蛇床子32次、莪术31次、地肤子28次、青黛25次、红花25次。
二、中药的制备及工作浓度的选择
上述10味中药均购自湖南中医药大学第二附属医院卞药房，其提取液的制备是由2010级药学院研究生李琴突于药剂实验室完成。制作工艺如下：按照《中华人民共和国药典》（2010年版）的提取方法进行改良：每种中药饮片用电子天平各称取20g将药物粉碎，过20目帛，称取药物粉末lOg放入500ml锥形瓶中。首先，向锥形瓶中加蒸馏水lOOml浸泡2h，放入超声仪中超声提取30min，药液高速离心lOmin，然后吸取上清液，蒸发浓缩为100%液20ml;其次，向锥形瓶中加2倍体积（即40ml) 95%乙醇，充分混匀，放置48h后，用一层滤紙过滤，于9(rC水浴回流乙醇，浓缩得到100%的提取液lOml,即每ml抽提物相当于中药生药lg。用0. 22微孔滤膜过滤，调pH值为7.0，装入清洗并高温消毒后的青霉素瓶中（lOml/瓶，中药液浓度为Ig/ml),经封口膜密封后，贴上标签放到-2度水箱中备用。使用时加入含10%胎牛血清的RPMI1640培养基按100jag/ml、 5 0)ig/mK 25Mg/ml稀释至三个工作浓度。
第二部分单味中药对人类皮肤良性角质形成细胞株HaCaT细胞增殖的抑制试验材料与方法.........5
1实验材料........5
1.1药物...........6
1.2细胞株..........8
1.3实验试剂.........8
1.4实验仪器...........9
2实验方法...........10
2.1溶液的配制...........10
2.2中药培养基的制备及工作浓度的选择...........11
2.3血清免疫球蛋白的制备及外周血单一核细胞悬液的制备...........13
2.4 HaCaT细胞的培养、传代、接种及增殖造模...........14
2.5中药培养基的处理...........15
2.6噻唑兰比色法（MTT法）测定细胞的增殖...........16
3统计学分析...........17
结果...........18
1 HaCaT细胞的增殖及抑制的影响..........18
2 MTT法检测单味中药对HaCaT细胞增殖的影响...........19
2.1 10种单味中药不同浓度的OD值比较...........19
2.2 10种单味中药对HaCaT细胞增殖的抑制情况.......20
2.3中药组、浓度之间的关系...........21
2.4 10味中药OD值的两两比较...........22
2.5 3种浓度对HaCaT细胞增殖的影响...........22
2.6各中药与浓度的交互作用...........23
3讨论...........25
1.银屑病与角质形成细胞、外周血单核细胞、免疫球蛋白的关系...........25
2.HaCaT细胞体外培养的概况...........26
3.银屑病细胞模型...........26
3.2中药的歸选研究...........26
3. 3本实验对HaCaT细胞增殖的影响...........28
3.4探讨中药抑制HaCaT细胞增殖的机制...........30
结论...........31
参考文献...........32
结论
1.徐长卿无明显抑制HaCaT细胞增殖的作用，且与浓度无关。
2.地肤子、青黛、红花、莪术、黄柏、苦参、生大黄、丹参、蛇床子均对经银屑病人血清免疫球蛋白及外周血单一核细胞处理后的HaCaT细胞增殖均有抑制作用，并且有量效关系，呈浓度依赖性增强。
3.红花与青黛、莪术之间，黄柏与苦参之间，蛇床子与丹参之间无统计学差异；其他各组间有统计学意义。其中地肤子的抑制作用最强，其次是青黛、红花、莪术。
参考文献
[I]国家药典委员会，中华人民共和国药典（2010年版).第九版.中国医药科技出版社：中华人民共和国药典委员会，2010.
[2]袁劲松，周利平，胡长发，高进.中药对银屑病抗体搭桥角质形成细胞/单一核白细胞粘连的影响[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2005, 4 (4) ： 240-241.
[3]周英朋，郭德田.人免疫球蛋白的连续提取及抗IgG-Fc重链抗血清的制备[J].宁夏医学杂志，1986, 8 (2): 79-82.
[4]刘爱国，杨桂有，刘晓磊，孙婷军，徐清.牛血清中免疫球蛋白的提取研究[J].食品科学，2007, 28 (9): 261-265.
[5]吴鹏，刘映峰，梁东辉，陈允钦.提高人外周血单核细胞分离率的方法探讨[J].实用医学杂志，2008, 24 (5): 707—708.
[6]Meerchaert J, Furie M B. Monocytes use either CDllb/CD 18 or VLA4 to migrate acrosshuman endothelium in vitro [J]. J Immunol, 1994,152(2): 1915-1920.
[7] Swmiheck G.Chair's Introduction: Psoriasis dermatology progress & perspectives.Theproceedings of the 18th world congress of dermatology. USA: ParthenonPublishing, 1996:678.
[8]Weinstein GD, McCullough, JI. Cell Kinetic Basis for Pathophysiology of Psoriasis. JInvest Dermatol,!985,85:579.
[9] Zheng Y， Danilenko DM, Valdez P, et al. Interleukin-22, a TH17 cytokine, mediatersIL-23-induced dermal inflammation and acanthosis. Natura. 2007;445:648-51.
[10] Res PCM,Piskin G, de Boer OJ, van der Loos CM, Teeling P, et al. Overrepresentation ofIL-17A and IL-22 Producing CDS T Cells in Lesional Skin Suggests Their Involvement inthe Pathogenesis of Psoriasis. PLoS ONE. 2010.5(11): el4108.