前言
前列腺增生（BPH）为老年常见病，其主要症状有尿频、尿急、夜尿多、排尿难、尿流细丝或中断、尿滴长久不尽等，危害患者的身体健康[1]。据统计，超过50％的老年人患有前列腺增生。到2020年，将有近四千五百万老年人患有前列腺增生。前列腺增生的发病机制，目前尚不能完全解释清楚，但有以下几条原因已经得到公认：一、年龄是一个不可忽视的因素；二、雄激素的影响在前列腺增生发病过程中起着非常重要的作用；三、多肽生长因子（如血管内皮生长因子、碱性成纤维生长因子、转化生长因子β1）被证实在细胞的增生和调亡过程中起着非常重要的作用；四、近年来，炎症因素的影响亦开始受到了人们的重视[4]。目前治疗BPH的化学药物按其作用机制不同可分为α-受体阻滞剂（如哌唑嗪、四喃唑嗪）和5α-还原酶抑制剂（如保列治）等。这些药物可松驰平滑肌，解除尿路梗阻的动力因素，迅速缓解症状，起到治标的作用，但不能逆转前列腺增生，并不能治本，尤其是它们具有一些副作用，如：保列治（非那甾胺）具有促使男性乳房发育，损伤肌肉等副作用，因此目前中医中药治疗是我国BPH患者的重要疗法之一，日益受到重视。
中医认为前列腺增生多为湿热下注、肾阴亏虚、瘀血凝聚等所致，采用清热通淋、滋补肾阴、活血化瘀等治则。滋肾通关丸，亦称滋肾丸，出自元代李杲《兰室秘藏》，具有治下焦湿热，小便癃闭，点滴不通的功效。用于治疗热蕴膀胱，尿闭不通，小腹胀满，尿道涩痛。
“癃闭”为中医学术语，是以排尿困难，甚至小便不通为主要临床表现，其中“癃”是指小便不畅、点滴短少，病势较为缓慢者；而“闭”则是指小便闭塞点滴不通，病势较急骤者。《医学必读》说：“闭与癃二症也，新病为溺闭、盖点滴难通也；久病为溺癃、盖瘘出短少也”。BPH临床上主要引起下尿路梗阻，表现为尿频、排尿困难和尿潴留等，长期的梗阻，还可造成肾功能的损害。根据临床表现，BPH当属中医学“癃闭”范畴，事实上滋肾通关丸在临床也主要用于前列腺增生的治疗，疗效显著，是我国基本中成药。
滋肾通关丸由知母、黄柏和肉桂三味常用中药组成，其药材质量比为知母: 黄柏:肉桂＝10:10:1～0.3。其中知母为君药，有清热泻火之功，上能清肺热，下能滋肾燥，为历代医家所常用。臣药黄柏降实火，清湿热，善治下焦湿热。反佐药肉桂，药性辛热，有防治知母黄柏药性过寒之功。故汪昂云：“知母辛苦寒滑，上清肺金而将火，下润肾燥而滋阴，入肾经气分，黄柏苦寒微辛，泻膀胱相火，补肾水不足，入肾经血分。故二药每相须而行，为补水之良剂。肉桂辛热，假之反佐，为少阴引经，寒因热用也。”
滋肾通关丸临床应用较为广泛，但其作用机制尚未见研究，其物质基础尚有待于探索。因此，我们对滋肾通关丸治疗前列腺增生的作用进行实验研究并探讨其作用机制，对其活性物质基础进行探索，为实现其二次开发奠定基础。
第一部分滋肾通关丸药效学及其作用机制………………………………………7
第一节滋肾通关丸药效确证……………………………………………………7
第二节滋肾通关丸作用机制……………………………………………………11
第二部分滋肾通关丸的物质基础初步探讨………………………………………19
第一节“药对”知母黄柏对防治前列腺增生药效确证………………………19
“药对”知母黄柏对丙酸睾酮诱导的大鼠前列腺增生的防治作用…19
“药对”知母黄柏抗炎镇痛试验研究…………………………………26
第二节“药对”知母黄柏的防治前列腺增生药效物质基础研究……………29
“药对”知母黄柏活性组份群防治前列腺增生作用…………………30
“药对”知母黄柏活性组份群防治前列腺增生作用机制研究………35
研究总结……………………………………………………………………………49
参考文献…………………………………………………………………………51
文献综述…………………………………………………………………………54
研究总结
前列腺增生症(BPH)是中老年男性常见病，资料显示，前列腺增生在40岁以前发病率很低，50岁以上占40%，80岁者近90%，90岁时几乎100%患有该病。因此，研究治疗该病的有效药物,是医药界面临的迫切任务，有着重要临床意义。
滋肾通关丸为临床常用药对，出自李东垣《兰室秘藏》,主治阴虚发热，骨蒸潮热，盗汗等症；阴虚火旺，相火妄动，所引起的梦遗、滑精诸症；阴虚阳不能化，小便不利者；以及糖尿病等症。其在临床应用广泛，备受历代医家青睐。但其作用机制以及物质基础尚未见报道。
本课题先通过对滋肾通关丸全方的药效学试验确证了滋肾通关丸对前列腺增生的治疗效果。进而对血清睾酮和双氢睾酮进行检测。对前列腺组织中VEGF、bFGF、TGF－β1的表达水平进行免疫组织化学检查。得出结论：滋肾通关丸全方具有降低血清双氢睾酮的效果，提示其具有5α还原酶抑制剂的特点。同时滋肾通关丸全方可以抑制VEGF、bFGF表达，提高TGF－β1表达，说明滋肾通关丸可以抑制前列腺细胞增生，同时加速前列腺细胞凋亡。
为进一步探索滋肾通关丸治疗前列腺增生的物质基础，我们进行了如下工作。首先，根据传统医学对滋肾通关丸全方的解释以及对滋肾通关丸药物组成比例的观察，我们推测，滋肾通关丸的君药和臣药“药对”知母黄柏可能为滋肾通关丸全方治疗前列腺增生的主要药物。我们通过动物试验再次证实了这个观点。通过文献报道以及以往的工作经验，我们推测知母的主要化学成分——黄酮类成分和皂苷类成分以及黄柏的生物碱类成分可能为“药对”知母黄柏治疗前列腺增生的物质基础。通过对三种化学成分进行不同的配伍分组，我们得出单独应用给药组，对前列腺增生有一定治疗作用，但不如三种化学成分联合应用效果好。这点与中医认为“药对”知母黄柏“相须为用”的特点相吻合。
通过对“药对”活性组分群抑制前列腺增生的机制研究，我们发现，药对活性组分群具有与全方同等抑制VEGF、bFGF以及提高TGF－β1表达的效果。基因芯片分析也同样证实了这个结果。抗炎镇痛试验以及基因芯片分析结果证实，药对药对活性组分群具有良好炎症抑制效果。炎症对与前列腺增生历来是相互影响，不可忽视的因素，对炎症的治疗能够消除前列腺增生的重要诱因，对前列腺增生的治疗提供重要帮助。
纵上所述，滋肾通关丸具有良好的前列腺增生治疗效果。其作用机制是通过抑制双氢睾酮，抑制VEGF、bFGF表达，提高TFG-β1表达来发挥作用的。通过上述途径，滋肾通关丸达到了从抑制增生到加速凋亡双向起效的治疗效果。知母总黄酮、知母总皂苷、黄柏生物碱为其主要活性物质，相互伍用，治疗效果最佳，体现“药对”黄柏“相须为用”的特点。三者的最佳配比有待进一步研究。本研究为临床合理应用及新药开发提供理论基础。
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