前言
大叶钩藤Uncariamac属于茜草科Rubiaceae钩藤属unc硕a植物，《中华人民共和国药典》加10年版收载，作为中药正品钩藤来源的一种。藤属植物系泛热带分布类型，全世界34种，主产热带地区。其中我国有n种、1变型。大叶钩藤主要分布于广东、广西、云南等省。
作为传统中药，钩藤味甘，性微寒;功清热平肝，息风止痉。钩藤的药用部位是带钩茎枝，传统的采收加工方法为去叶，将带钩的枝茎剪成3cm左右，其他部位则被作为废料丢弃。钩藤属植物在民间广泛应用，除传统药用带钩茎枝外，还多采用根及老茎药用，因此导致人为的资源破坏，有的品种因逐年采挖，资源面临濒危;同时由于钩藤的购销逐年增加，一直供不应求，属生产收购不足，供应偏紧的品种。据全国中药资源普查统计，钩藤年需要量约90一100万公斤，资源蕴藏量约700万公斤。钩藤生长周期至少要2一4年，显然资源已不能满足市场长期大量的商品需求。
现代化学研究表明，该属植物含多种叫噪类生物碱，主要为钩藤碱和异钩藤碱。不同种类的钩藤，其生物碱含量也有一定差别，其中钩藤、大叶钩藤、华钩藤中的钩藤碱、异钩藤碱含量较高。早在上世纪70一80年代，我国学者便对国产钩藤资源进行了较为系统的研究，发现钩藤叶的总生物碱含量与带钩茎枝相近，而钩藤叶的资源产量远比带钩茎枝的丰富。日本学者对日本产钩藤(Uncariarhxnchop(Miq)Jacks.)的叶、钩等部位的9种生物碱进行化学分析比较，结果表明叶中化学成分与钩相似。钩藤叶作为一种药用资源，来源丰富，药用价值及综合利用潜力大，但由于缺乏对钩藤叶进行系统的药学和药理毒理学研究，使其一直没有被开发利用。在药材采制过程中，大量的叶被丢弃，造成了资源的极大浪费。大叶钩藤uncariamac。认龟叶的重量和产量本身就大于其它近缘种，据调查仅在部分产地收购其带钩茎枝，叶的资源一般很少使用根据报道，大叶钩藤与钩藤、钩藤叶都有相似的化学成分，如钩藤碱、异钩藤碱等。
因此，本课题对大叶钩藤进行资源调查，在此基础上进行生药学研究以及有效成分含量测定，为这一药用植物新资源的合理开发利用提供依据。现代药理研究表明，钩藤及其有效成分对中枢神经系统和心血管系统具有较强的抑制作用，能明显降低大脑皮层的兴奋性，显著降低血压，并表现明显的镇静、安眠、解痉等作用。钩藤生物碱对中枢神经系统的突触传递过程有明显的抑制效应，具有神经保护作用。口服给予钩藤提取物或其所含的叫噪类生物碱如柯诺辛、柯诺辛B、异钩藤碱和缝籽嗦甲醚，能显著抑制小鼠的运动反应。钩藤碱能增强对戊巴比妥钠的镇静，催眠作用，同时增加下丘脑和皮层5一HT含量，促进大脑4个区域内源性多巴胺的释放。前人已对大叶钩藤叶进行过化学成分研究，但未见有关药理作用方面的报道，本课题组自2002年起对中药钩藤的活性成分和药理作用进行了系列研究，在对钩藤碱抗苯丙胺类中枢兴奋剂依赖方面取得一定成绩，因此，本课题沿袭课题组思路，选取大叶钩藤对中枢神经抑制及抗药物依赖作用为药理学研究方向。
药物依赖被定义为是一种由滥用药物与大脑奖赏系统相互作用产生的慢性、复发性脑疾病，主要表现为强迫性用药症状和持续性渴求状态。药物依赖包括精神依赖与躯体依赖。条件性位置偏爱实验(conditionedPlacePreferenee，CPP)是评价药物精神依赖性的一种有效方法。目前关于药物成瘾的机理研究很多，普遍接受的观点是Gaetano提出的滥用药物是自然奖赏物的替代物的学说，认为所有天然的奖赏性刺激(如食物等)都是通过作用于脑内奖赏系统，最终引起伏隔核内DA释放量增多而产生奖赏效应。所有成瘾性药物都能够直接兴奋机体内部的奖赏系统产生奖赏效应，从而造成心理依赖。中脑边缘多巴胺系统几乎参与了所有滥用药物的奖赏效应。在此神经通路上的多种神经递质，如DA，5-HT，ACh，CABA都不同程度参与奖赏效应的形成。
综上所述，本课题拟对大叶钩藤叶对中枢神经系统以及抗药物依赖等药理作用进行研究，同时进行性状鉴定、显微鉴定、主要成分含量测定等生药学研究及资源调查分析，为这一药用植物资源的合理开发利用提供药效学依据，同时选择方便快捷的鉴定和检测方法。通过对研究结果的分析与整合，为钩藤属药用植物的综合利用及中药资源的可持续发展提供新的思路和途径。
第一章大叶钩藤资源调查及大叶钩藤叶的生药学研究...........4
第二章大叶钩藤生物碱含量实验研究.......................................11
第三章大叶钩藤中枢抑制作用的实验研究...............................17
第四章大叶钩藤抗苯丙胺依赖作用的实验研究.................25
第五章全文讨论..................................37
参考文献.............................................................42
第五章全文讨论
本研究对大叶钩藤叶进行了性状鉴定、显微鉴定、钩藤碱含量测定等生药学研究及大叶钩藤的资源调查分析，同时对其中枢神经系统以及抗药物依赖等药理作用进行了较深入的研究，为这一药用植物新资源的合理开发利用提供药效学依据，同时选择方便快捷的鉴定和检测方法，进而为钩藤属药用资源的综合利用及可持续发展提供新的思路。
本研究对大叶钩藤进行资源调查发现，广东罗定西部含丰富的大叶钩藤资源，而当地无污染性工业，生态环境优良，植被保存比较完好，且有深厚的民间用药文化背景，应积极保护资源并进一步合理开发利用。对大叶钩藤叶进行生药学研究结果发现，大叶钩藤叶叶片较大，含众多单细胞非腺毛，栅栏组织细胞2一3列，叶片薄璧细胞含草酸钙簇晶。生物碱沉淀反应和薄层层析色谱分析结果表明，大叶钩藤叶与对照药材至少有2种相同的生物碱成分。
本研究用日PLc对大叶钩藤的带钩茎枝和叶进行了钩藤碱与异钩藤碱的含量的测定，测定结果表明:钩藤碱含量大叶钩藤叶为0.016%，大叶钩藤带钩茎枝为0.015%，异钩藤碱含量大叶钩藤叶为0.006%，大叶钩藤带钩茎枝为0.004%。根据实验数据，大叶钩藤的叶和带钩茎枝具有开发利用的价值，尤其是大叶钩藤叶资源丰富，一年可多次采摘，循环周期短，而无需采伐整株植物，既保护了药材资源，又可长远利用，是一种颇具开发价值的中草药资源。
本研究主要考察大叶钩藤对中枢神经系统的抑制作用。中枢神经抑制实验包括镇静、催眠、抗惊厥实验。从实验结果可知，大叶钩藤叶各剂量组给药后，小鼠的自发活动减少，镇静作用与地西浮相近，且起效时间较快。大叶钩藤能增强戊巴比妥钠中枢抑制作用，增加入睡小鼠数量，叶高剂量组能延长小鼠睡眠持续时间，且与阳性药组比较差异无统计学意义。
条件性位置偏爱实验人为将药物与动物自然状态下的非偏爱侧相关联，通过比较动物在非偏爱侧停留时间的长短来观察药物精神依赖性的强弱。从本实验的结果可见，模型组小鼠给药后在伴药箱中的停留时间延长，表明模型组小鼠对白箱产生C即效应，说明苯丙胺有较强精神依赖性。与苯丙胺模型组比较，小鼠经药物治疗后，能基本消除对苯丙胺形成的位置偏爱;大叶钩藤叶低、高剂量以及带钩茎枝组均能够在一定程度上消除苯丙胺诱导的小鼠条件性位置偏爱;带钩茎枝本身没有导致小鼠的奖赏效应或厌恶效应。
苯丙胺类中枢兴奋剂(amphetallline一tyPestimulants，ATS)依赖是一种机体反复接触苯丙胺类精神活性物质而引起的慢性复发性脑疾病，其主要特点是强迫性觅药、无限制摄药、强烈的渴求心理以及中断用药后出现戒断症状等。ATS具有很强烈的中枢兴奋作用和致欣快作用，研究显示这主要与其影响多巴胺释放和阻止重吸收有关，ATS作用于多巴胺能神经元，促进多巴胺释放并阻止其重吸收，导致大量多巴胺释放而产生神经兴奋与致欣快作用口。有研究者认为细胞质内大量多巴胺郁积，产生的大量氧化产物是ATS造成神经末梢受损的基础。研究认为，所有成瘾性药物都能够直接兴奋机体内部的奖赏系统产生奖赏效应，而造成心理依赖。腹侧被盖区和伏隔核是奖赏效应的主要核团。中脑边缘多巴胺系统几乎参与了所有滥用药物的奖赏效应。另外，在此神经通路上存在多种神经递质，如DA，5一HT，Ach，以BA以及内源性阿片系统，这些神经递质和神经系统都不同程度参与奖赏效应的形成。