引 言
新城疫（Newcastle Disease, ND）是养禽业中最常见的烈性传染病之一，新城疫是禽类的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病[1]，它是由新城疫病毒引起，被 OIE 列为 A 类疫病[2]。典型特征为高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血，是危害我国养禽业的一种主要传染病，具有很高的发病率和病死率。家禽尤其是鸡等感染了新城疫病毒后，会出现站立不稳和运动失调等典型症状，同时产蛋率受到影响并急剧下降，给养禽业造成巨大的经济损失。目前针对新城疫疾病的防疫，国内主要采取对所有养殖的鸡群强制接种免疫新城疫疫苗，但是由于鸡群个体情况的差异，鸡群对新城疫病毒具有不同的易感性，以及受到鸡群母源抗体的影响，新城逸疫苗的免疫保护效果不均一，鸡新城疫仍然在养殖区域内不同程度的流行，并且最近几年呈现非典型特征。随着基础科学研究的进步，新城疫病毒的科学研究报道已经越来越多。新城疫病毒（NDV）是一个单股负链的 RNA 病毒，病毒外形呈现多形性，有时候也可以是丝状，病毒颗粒直径在 150~300nm 之间，具有囊膜以及纤突结构，核内的核衣鞘呈现出螺旋对称，基因组长度在 15~16Kb[3]。新城疫病毒表面有两种糖蛋白，分别是：融合蛋白（F）和血凝素神经氨酸酶（HN）。因此，NDV 拥有神经氨酸酶活性以及血凝性等生物活性[4]。也正因为 NDV 病毒颗粒表面具有血凝素，新城疫病毒可以凝集多种宿主（包括家禽类）的红细胞表面的受体（HA），同时凝集的效果又可以被新城疫血清所特异性抑制，基于这样的一个特异性的生化反应（HA-HI），我们可以对新城疫病毒感染的家禽进行诊断[5,6]。
新城疫病毒 (NDV)对理化等外力因素的抵抗力较强，研究表明，在 55℃，45min或者阳光下照射 30min 以上才可以将其灭活。NDV 可以在自然环境中顽强生存较长时间，在爆发过该病毒一个月后的疫区，仍然可以检测出 NDV 的存在，值得注意的是，NDV 可以在屠宰后的冷冻受感染的鸡肉中存在 2 年以上的时间，NDV 的这种特性对于养殖业而言是一个巨大的潜在威胁[7]。面对新城疫病毒的顽强性以及广泛的传播性，新城疫的防控一直是畜牧兽医领域研究的热门方向，就目前而言，新城疫疫苗作为该病毒防控的有效手段，已经在临床上进行应用。虽然目前已经有相关的商品化新城疫疫苗上市，根据许多研究报道，接种疫苗后，如果禽类体内的抗体达不到有效的滴度，仍然有很大的概率被病毒感染致病，进而造成巨大的经济损失。单独使用新城疫疫苗免疫的鸡，疫苗保护效率平均为70%左右，这是由于疫苗的来源以及鸡群个体差异导致（母源抗体影响，个体营养状况，免疫应答刺激效果，是否使用激素药物等）[8]，所以，对于大规模的群体免疫效果来讲，不仅需要评估个体免疫效果，同时也要考虑整个群体免疫后，体内抗体效价的均匀度。研究如何提高新城疫疫苗的保护效果，特别是群体接种免疫以后提高抗体效价的均匀度，达到一个理想的免疫保护水准，是目前探索新城疫病毒防控的一项重要任务，也是减少我国家禽养殖业经济损失的一项有效手段。在当前的研究中，通过免疫增强剂和新城疫疫苗结合使用来提高新城疫疫苗的免疫保护效果是主要的方向。免疫增强剂可以增强动物的免疫系统功能，提高动物对各种传染病以及寄生虫病的抵抗力。在实际的生产实践过程中科学合理地应用免疫增强剂，能够有效提高动物的成活率以及获得最佳的繁殖效果，切实提高经济效益。因此，开发高效、应用方便以及适合大规模现代化生产的新城疫疫苗增强剂，才是真正符合我国现代化养殖业的需求，符合禽类养殖业的健康可持续发展。
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文献综述
1 新城疫免疫研究进展
新城疫自发现以来，已经多次在世界范围内爆发，造成了巨大的经济损失。随着各国对新城疫疫苗的使用，使得新城疫疫情得到了一定程度的有效控制，但是小规模的爆发和流行，尤其是最近几年来呈现非典型爆发的特点，仍然给养禽业造成巨大的损失。因此，对新城疫病毒的免疫预防研究仍是目前防控该病毒的重点内容。
1.1 禽类的免疫系统
免疫器官、免疫分子和免疫细胞是构成禽类免疫防御体系的三大要素，是机体识别免疫信号，激活免疫应答反应以及执行免疫效应和维持持久免疫效果的基础。胸腺、法氏囊以及脾脏和淋巴组织是禽类的外周免疫器官，参与机体的细胞免疫和体液免疫。胸腺是细胞免疫的中枢器官，主导免疫细胞的产生，如 T 细胞等。而脾脏和淋巴组织等参与机体全身的体液免疫和细胞免疫，是 T 细胞和 B 细胞应对外来抗原刺激产生免疫应答的部位之一。B 细胞接受外来免疫抗原刺激，产生特异性的抗体。特异性的抗体就属于免疫分子的范畴。此外免疫分子还有各种细胞因子和补体等，参与免疫应答和免疫调节。禽类常见的免疫分子是免疫球蛋白，这是一类具有抗体活性或者具有和抗体结构相似性的球蛋白分子，普遍存在于血液、组织液和外分泌液中，是参与机体免疫防御的重要组成部分。
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1.2 肉鸡新城疫疫苗的免疫应答特点
肉鸡的新城疫疫苗免疫应答可以划分为三类：体液免疫应答、局部免疫应答以及细胞免疫应答。三类免疫应答方式既独立发挥作用，又具有协同作用，三者缺一不可，是一个整体免疫网络的有效组成成分。体液免疫是由 B 细胞介导，在外来病原刺激下，分泌一些细胞因子以及特异性的抗体等，发挥免疫保护效果。如在新城疫病毒的刺激下，禽类自身的 B 细胞识别病毒抗原成分，在 Th 细胞的协助下迅速分化和成熟，分泌抗新城疫病毒的特异性抗体，参与新城疫病毒的中和作用以及抗体介导的细胞毒性作用。局部免疫的发生部位在新城疫病毒的入侵部位，即消化道和呼吸道。当新城疫病毒感染肉鸡后，在消化道和上呼吸道均可以检测出相应的抗体。在国内外的大量科学研究中发现，新城疫(ND)病毒活疫苗通过滴鼻和饮水等接种途径进行禽类接种，可以有效诱导机体的粘膜免疫，促使禽类局部合成分泌特异性的抗体，这种抗体是 IgA；Bread 等[13]证明，ND 弱毒苗通过滴鼻或者喷雾接种可以有效提高呼吸道的抵抗能力。
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试验二 人工合成小肽的最适使用浓度研究......15
1 材料与方法.......15
1.1 试验材料............15
1.2 试验仪器............15
1.3 试验设计............15
1.4 检测指标与方法..........16
1.5 肉鸡血清中新城疫 HI 抗体的效价水平..............16
1.6 数据处理与统计分析............ 16
2 结果与分析.......16
3 讨论........ 16
试验二 人工合成小肽的最适使用浓度研究
免疫增强剂要发挥最佳的免疫保护效果，需要一定的纯度和浓度。低纯度无效果或者效果不佳，在保证纯度的前提下，采用一定的使用浓度，不仅可以获得最佳的效果，也可以最节约成本，同时，在高浓度下也未必可以获得最佳效果，有可能还会导致效果降低。小肽可以促进机体免疫系统的发育，提高动物的免疫功能，这个已经被证实，如：杨维仁等[22]发现植物小肽提高泌乳猪的免疫性能；田刚等[17]研究证实乳源性活性小肽增强巨噬细胞的免疫功能等。本研究中的试验一部分在四种人工合成小肽对肉鸡新城疫疫苗免疫效价影响研究中进一步论证了上述结论，同时筛选出了 3H4直链小肽在提高新城疫疫苗对肉鸡的免疫效果方面具有最强效应，基于此，本试验拟通过设计不同梯度浓度的 3H4 添加量，通过效价比较分析，进一步探究其在肉鸡新城疫疫苗效价增强方面的最适的使用浓度
1 材料与方法
1.1 试验材料
人工合成免疫小肽 3H4：1mg，水溶性，按照低浓度（0.5ug/150L）、中等浓度（1ug/150L）和高浓度（2ug/150L）配制梯度液。新城疫耐热保护剂活疫苗（Ⅳ系）：购于上海海利生物技术股份有限公司产新益净，批号 20150301。新城疫抗原（NDV）购自哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司。鸡 1%红细胞悬液：制备方法见试验一部分.
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结 论
1. 人工合成小肽可以有效促进鸡新城疫疫苗的免疫效果，本研究中筛选到的3H4 人工合成小肽，其免疫增强效果比已经报道过的黄芪多糖和 IL-18 等免疫增强剂的作用稍强。3H4 人工合成小肽可以作为一个潜在高效的鸡新城疫疫苗佐剂。
2. 人工合成小肽的活性与其剂量浓度之间存在着一个量效关系，要发挥最佳的免疫增强效果，使用浓度需要在一个合适的范围之内。本研究证明，在浓度（1ug/150L）下，人工合成小肽 3H4 可以取得最佳的新城疫疫苗免疫增强效果。
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参考文献（略）