1 猫杯状病毒感染
1.1 病原研究
.猫杯状病毒感染是一种由猫杯状病毒（Feline calicivirus, FCV）感染而引起猫的一种全身性或呼吸道症状疾病。近年来，由 FCV 感染引起的致命性全身性疾病的猫死亡率已达到50%。FCV 感染的主要临床症状是上呼吸道症状、口腔溃疡和发热。在少数情况下，FCV感染还与急性跛行综合征、流产、肠炎和严重肺炎有关。
猫杯状病毒（FCV）是一种直径约 30-35nm 的小型无包膜 RNA 病毒，属于杯状病毒科的杯状病毒属。二十面体衣壳围绕着大约 7.7kb 的正链单链 RNA 基因组，该基因组在三个开放阅读框（ORF）中。ORF1 编码 200kD a 多聚蛋白，由病毒编码的酶（3C 类半胱氨酸蛋白酶）加工成 p5.6、p32、p39（NTPase）、p30、p13（VPg）和 p76（Pro-Pol）[1,2]。ORF2 编码一个 73kDa 的衣壳前体蛋白（pre-VP1），该蛋白经过翻译后加工释放出一种由124 个氨基酸组成的小蛋白，称为衣壳的前导蛋白和 60-kDa 的成熟衣壳蛋白 VP1[3]。第三个 ORF（ORF3）位于基因组的 3'末端，编码 106 个氨基酸（aa）的蛋白质（VP2），预测分子量为 12kDa[4,5]。与其他 RNA 病毒一样，FCV 的基因组不断发生快速突变，随着时间的推移，这增加了毒株的多样性。但尽管 FCV 分离株之间存在广泛的抗原多样性，但它们之间的抗原交叉反应程度足以将它们归类为单一血清型 [6]。
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1.2 流行病学
目前，猫杯状病毒（FCV）在世界范围内流行，据欧洲猫病咨询委员会统计，FCV 在家养宠物猫中的流行率为 10%，但在多猫环境中，如收容所、猫群集聚地和猫舍，高达 40%的猫检测到 FCV[7-9]。猫科动物是主要易感动物，FCV 不仅能在猫中传播，也能在狮子[10]、虎[11,12]和猎豹[12]中传播。从患肠炎的狗的粪便样本中也检测到 FCV 的排毒[13]。
在猫的上呼吸道疾病临床病例中，安徽省猫的 FCV 的感染率达到了 71.5%[14]，北京地区 FCV 的阳性率为 46.3%[15]。在猫的结膜炎临床病例中，日本本土猫的 FCV 阳性率有21.2%[16]。在猫的口腔炎症病例中，Hou 等[17]对来自欧洲五个国家的猫口炎拭子进行检测，发现 FCV 的检出率在 20%以上。在猫牙吸收疾病和猫慢性牙龈炎中，FCV 的阳性率分别为 22.5%和 60.0%[18]。
曲雪婷等[19]从山东省大量采集的样本中发现，FCV 的整体阳性率为 13.4%，其中在流浪猫中的阳性率为 44.1%，在宠物医院、养猫家庭和流浪猫中三个取样环境中，流浪猫的FCV 检出率最高并显著高于猫疱疹病毒（Feline herpesvirus-1， FHV-1）和猫细小病毒（Feline Parvovirus，FPV），这表明在自然环境下，FCV 的传播范围更广。
猫杯状病毒（FCV）在环境中能存活很久，并且能抵抗季胺化合物的常规消毒。在环境中，FCV 最长能存活 28 天，FCV 可以通过口腔、鼻腔分泌物直接传播，也可以通过被FCV 污染的物体间接传播。患病猫经过治疗症状消失后，依然可以持续很长时间或者终身向外排毒，因此猫杯状病毒的隐性感染者也是猫杯状病毒在猫群内流行的重要因素。
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2 方法
2.1 细胞复苏
从液氮罐中取出保存的 F81 细胞，放于 37℃水浴锅中加热 1-2 min 进行解冻，于水平离心机以 1000 rpm 离心 10 min。弃去冻存管里的液体，加入 1 mL 含 8%胎牛血清的细胞培养生长液，吹打混匀。将冻存管里的液体转移至 T25 细胞瓶中，再加入 5 mL 的 8%细胞培养生长液，八字摇晃摇匀使细胞铺板均匀。于倒置显微镜下观察后，置于 5%CO2，37℃培养箱中进行培养。
观察细胞生长状态，待细胞长至 90%单层铺满时进行细胞传代。在细胞间超净台中，弃去 T25 细胞瓶内细胞培养基，每瓶加入 1 mL 0.25%胰酶，置于细胞培养箱中 1 min，在倒置显微镜下观察。待细胞出现明显圆缩分离时，在超净台中将细胞瓶内胰酶弃净，加入2 mL 细胞生长培养液终止胰酶消化细胞。将细胞均匀的吹打下来混匀，均分至两个新的T25 细胞瓶内各 1 mL，每个细胞瓶加入 5 mL 细胞生长培养液。八字摇晃摇匀，放入 37 ℃，5%CO2培养箱中培养。
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2.2 细胞冻存
当细胞单层铺满后，弃去培养基，使用 1 mL 胰酶进行消化，待细胞圆缩分离后弃去胰酶。加入 2 mL 细胞培养液进行吹打混匀，将液体转移至灭菌的 4 mL 离心管中。于离心机以 1000 rpm 离心 10 min，弃掉上清液。每管加入 900 μL 的血清，100 μL 的 DMSO，混匀后转移至细胞冻存管中。做好日期和细胞名称的标记，放入细胞冻存程序降温盒置于-80℃冰箱保存，12 h 后转移至液氮罐中。
细胞培养至单层铺满后，弃去原培养基。加入 500 μL MEM 培养基，再加入 600 μL 病毒液，摇晃使之充分覆盖细胞，放入 37℃，5%CO2培养箱，孵育 1 h。取出培养箱内细胞瓶，加入 4 mL 2%FBS 细胞维持液，再放回细胞培养箱内继续进行培养 20 h。取出细胞培养瓶，用封口膜密封，放入-80℃冰箱中，冻融一次。收集细胞瓶内液体，放入离心管中，冷冻离心机 4℃预冷，3000 rpm 离心 30 min，取上清液保存。
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第三章 青黛散加减对猫杯状病毒感染的临床病例治疗 ........................ 45
1 材料 .............................. 45
1.1 试验动物 ................................ 45
1.2 试验药物 ......................................... 45
1.3 试验材料 ................................................ 45
结论 .................................... 52
第三章 青黛散加减对猫杯状病毒感染的临床病例治疗
3 结果
3.1 眼观治疗效果
从临床病例 1、3、6 号的治疗过程图可以看出，患猫的眼鼻分泌物逐渐消失。鼻子的溃烂出血多是由于鼻分泌物过多造成的，当鼻分泌物症状改善后，鼻中隔溃烂开始好转乃至愈合。2 号病例经治疗后舌部的大面积溃疡也逐渐愈合（图 3.1）。
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结论
1. 通过滴鼻的方式，以病毒滴度为 109.67TCID50/mL 的 1 mL FCV 病毒液接种于 6~12月龄猫，可以建立稳定的猫杯状病毒感染模型。
2. 青黛散高剂量（2 g/kg）、中剂量（1 g/kg）、低剂量（0.5 g/kg）组对猫杯状病毒感染都有不同程度的治疗效果。其中以 1 g/kg 青黛散治疗组的治疗效果最好。
3. 1 g/kg 青黛散加减应用于猫杯状病毒感染的临床病例中，有良好的治疗效果，治愈率达到 37.5%，有效率高达 87.5%。
参考文献（略）