前 言
慢性皮肤溃疡是由于皮肤组织缺损且合并慢性感染，伤口不能及时愈合导致的一种常见病。其特征是体表溃疡经久不愈，病程缠绵。由于该病慢性迁延、难以治愈且消耗甚大，严重影响患者的身体健康及生活质量。因此，慢性皮肤溃疡的治疗已引起国内外学者的广泛关注。
目前，根据该病大多发生在体表局部的特点，西医常以局部给药或物理方法进行治疗，如咪喹莫特制剂、激光手术等。中医则常以清热解毒立法，治疗途径以外治为主。通常采用熏洗、沐浴搓擦或油膏剂等外治方法。治疗本病的药物常以洗液和膏剂等局部给药形式应用，疗效较好。由于本病缠绵难愈，病程较长，易反复发作，为便于患者携带、使用、贮存，将其制成酊剂或软膏剂。但酊剂含有大量乙醇，对病变皮肤刺激性较大，且贮存过程中易发生溶剂浓度变化导致产生沉淀，进而影响疗效，故考虑将其制成软膏剂。患者将软膏剂涂搽于患处，可直接接触病变部位，通过皮肤给药发挥疗效，具有吸收快、作用强、使用方法简便、携带方便等优点，使患者易于接受。软膏剂副作用小，且治疗过程中不会造成患者患处皮肤的破损，治愈后患处肌肤如初，符合中医外治理念，故选择制成软膏剂。
本课题所研发的制剂是乳剂型基质的中药软膏剂。其基质光滑美观，水分蒸发后留有一层硬脂酸薄膜附着于糜烂创面而具有保护作用，阻断了病菌滋生的环境，增强了病变部位对细菌病毒的抵抗力，促进了创面组织的修复与再生。在本制剂的基质中，羊毛脂比例的增加，有利于制剂吸收溃疡创面分泌物，使药物的释放穿透作用大大增强。另外，本制剂中的药物以高纯度提取物形式加入，改变了传统软膏剂载样量小、用药量大且疗效差的缺点，显著提高了制剂的有效浓度和生物利用度，缩短了治疗周期。此外，乳剂型基质更易于涂布和洗涤，对皮肤有较好的保护作用，且不易污染衣物，携带方便。本方来源于临床验方，经对慢性皮肤溃疡患者的临床治疗观察，证明疗效确切，有很好的研究价值和推广前景。本课题按照国家食品药品监督管理局2007年7月颁布的《药品注册管理办法》中中药、天然药物第六类新药研究的技术指导原则，对疮疡消炎软膏制剂进行了试验研究。
第一部分 文献综述·····························9
一、软膏剂的概述································9
二、紫草的药理作用及临床应用·························12
三、大黄药理作用及临床应用的研究进展····························15
第二部分 疮疡消炎软膏药材提取物·······························18
一、紫草总萘醌提取工艺及质量标准研究························18
二、大黄总蒽醌提取工艺及质量标准研究···················32
第三部分 疮疡消炎软膏辅料筛选和制备工艺研究···················49
第四部分 疮疡消炎软膏的过敏性、溶血性及质量标准研究····················64
一、疮疡消炎软膏过敏性试验································64
二、疮疡消炎软膏溶血试验·····························69
三、疮疡消炎软膏的质量标准研究··························73
第五部分 总 结
慢性皮肤溃疡是一种常见的皮肤疾病，其特征是体表溃疡经久不愈，病程缠绵，该病慢性迁延、难以治愈且消耗甚大，给患者造成了很大的心理压力和经济损失，严重影响患者的身体健康及生活质量。因此，对治疗慢性皮肤溃疡药物的研制，具有较大的社会效益和经济效益。本试验对疮疡消炎软膏的药学部分研究主要有以下几个方面：
1 疮疡消炎软膏以中药材高纯度提取物的形式投料，有效地克服了天然产物有效成分含量波动大的缺点，提高成分的安全性和有效性，且由于提取物纯度高，增加了基质的载样量，进而提高制剂疗效，本课题对药材作了如下研究：
1.1 紫草总萘醌成分的提取分离工艺和质量标准研究：①试验采用高效液相色谱法以β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量为指标，测定紫草总萘醌的含量。在单因素考察提取方法时发现，紫草中总萘醌类成分遇热不稳定，颜色由紫红色变为墨蓝色，其含量显著下降。经文献报道，紫草中总萘醌类成分具有热不稳定性，当温度超过60℃时有效成分含量显著下降。CO2超临界流体处于临界温度（30.98℃）和临界压力（7.377MPa）以上，介于气体和液体之间，兼有气体液体的双重性质和优点。由于物质的溶解度与溶剂的密度成正比，CO2超临界流体密度接近液体，且比气体大数百倍，因此其具有与液体溶剂相近的溶解能力，溶解性增强；又因为CO2超临界流体粘度接近于气体，其扩散系数介于气体和液体之间，故其具有气体易于扩散和运动的特性，扩散性能好，有利于紫草中总萘醌的提取；再者在CO2超临界流体萃取过程中其萃取温度相对较低，对紫草中总萘醌类成分不产生变性。因此，本文选择具有高效、低温、纯天然、无化学污染等优点的CO2超临界流体萃取法作为提取方法。此方法萃取物纯度高，为其他传统提取方法的8~30倍，杂质少，可满足本制剂增加基质载样量，进而增强制剂疗效的需求。本试验分别对萃取温度、萃取压力和萃取时间进行了初步的考察，并选择这三个因素进行正交试验，得到最佳提取分离工艺参数：萃取温度为40℃、萃取压力为30MPa、萃取时间为120分钟。由于本制剂为创面用药，采用此方法提取无有机溶剂残留，对疮面无刺激性。②参照《中华人民共和国药典》2010 年版一部药典中药材提取物的相关检查项，建立了紫草总萘醌的质量标准，包括性状、干燥失重、炽灼残渣、重金属等项，通过薄层色谱法对其进行定性分析，采用高效液相色谱法对其进行定量分析，并制定了各项检查的限度。结果表明采用此工艺萃取物纯度高、杂质少，且具有低温、无毒、节能环保等优点，适合推广与放大生产。
1.2 大黄总蒽醌成分的提取分离工艺和质量标准研究：①本试验采用紫外分光光度法以 1,8-二羟基蒽醌的含量为指标，测定大黄总蒽醌的含量。先运用单因素试验法，对提取方法、提取溶剂和药材粒度进行初步考察；再运用正交试验法，对溶剂量、提取次数和提取时间进行优选，确定大黄总蒽醌的最佳提取工艺：简单回流法、药材粒度过 60目筛、提取溶剂为 70%乙醇、溶剂量为 8 倍药材重量、提取时间为 1 小时、提取次数为3 次。大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物，对含有酚羟基的蒽醌类物质具有较好的分离富集能力，故在分离纯化中，选用大孔吸附树脂作为分离纯化手段。本试验以大黄总蒽醌的吸附率和解析率为指标，对大孔树脂的型号、洗脱液浓度进行了考察，确定采用 S-8 型大孔树脂、用 75%的乙醇对树脂进行洗脱；并分别考察了大孔树脂的最大吸附量、水洗用量以及洗脱剂的用量，最终确定上样体积为 8BV、水洗用量为 5BV、洗脱剂的用量为 6BV；洗脱液浓缩后加盐酸调 pH 值为1.0，即得大黄总蒽醌提取物。采用本工艺制得大黄总蒽醌产量高、纯度高，适用于工业化生产。②参照《中华人民共和国药典》2010 年版一部药典中药材提取物的相关检查项，建立了大黄总蒽醌的质量标准，包括性状、干燥失重、总灰分等项，通过薄层色谱法对其进行定性分析，以 1,8-二羟基蒽醌为指标，采用紫外分光光度法对其进行定量分析，并制定了各项检查的限度。结果表明采用此工艺提取率高，提取物纯度好，适合于工业化生产。制剂以提取物的形式投料，有效地克服了天然产物有效成分含量波动大的缺点，提高制剂的安全性和有效性。
2 疮疡消炎软膏的制剂研究：以软膏剂的外观性状、涂展性和稠度等为考察指标，首先对常用软膏基质、丙二醇、乳化剂、液体石蜡、羊毛脂以及防腐剂等辅料进行筛选，通过透皮吸收累积渗透率筛选促进吸收剂及其用量，初步确定辅料的浓度范围；响应面设计优化法是采用二次回归法作为函数估计的工具，将多因子试验中因素与指标的相互联系用多项式近似拟合，依此可对函数的响应面和等高线进行分析，研究因子与响应面之间、因子与因子之间的相互关系，克服了正交、均匀设计等方法只能处理离散水平值而无法找出整个区域中因素最佳组合和响应最优值的缺点。本试验运用 Box-Behnken 响应面法进一步确定辅料浓度，结果在分析各个因素的显著性和交互作用后，得出制剂配方最佳工艺条件为：硬脂酸的用量为 29.03%，丙二醇的用量为 6.88%，月桂氮卓酮的用量为 2.73%。考虑工业化生产的可行性，故确定硬脂酸的用量为 29%，丙二醇的用量为7%，月桂氮卓酮的用量为 3%。；其次对软膏剂制备工艺进行筛选，确定工艺：硬脂酸、羊毛脂、液体石蜡作为油相，50℃水浴加热使熔融；将丙二醇、月桂氮卓酮、三乙醇胺、尼泊金乙酯溶解在水中作为水相，水浴加热至同样温度，将二者混合搅拌至冷凝，分装即得。
3 为了考察疮疡消炎软膏的安全性，本试验观察了家兔皮肤的过敏性反应，以红斑、水肿的轻重为考察指标，对疮疡消炎软膏进行过敏性试验研究，结果表明：疮疡消炎软膏经多次涂抹给药，与阳性药 2,4-二硝基氯代苯丙酮液做对照，家兔未见皮肤过敏反应，表明本制剂无明显的过敏性反应。运用观察法和紫外分光光度法来监测疮疡消炎软膏对家兔血液中红血球的溶血情况，以蒸馏水作为阳性对照，计算得出制剂的溶血率。结果表明：本制剂溶血率小于 5%，无明显溶血现象，表明本制剂是安全的，为进一步研究奠定了基础。
4 本部分试验对制剂处方中所含主药进行定性鉴别、一般性状检查、含量测定等研究，建立了可控制本制剂内在质量的质量标准。结果表明，薄层色谱法灵敏、分辨率高，专属性好。采用高效液相色谱法测定本制剂中 β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量，全波长扫描结果显示 β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的最大吸收波长为 271nm，在此波长下阴性样品无干扰，确定薄层扫描的激发波长为 271nm；β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的浓度在0.0098~0.1950mg/ml 时，呈良好的线性关系，其相关系数 r = 0.9995；在精密度、稳定性、重现性和加样回收率试验中，其各项结果的 RSD 均小于 3%，且平均回收率为 97.79%，表明该方法准确、可靠，方法可行。本试验在处方固定和原料质量、制备工艺稳定的前提下建立了疮疡消炎软膏的质量标准，包括性状、鉴别、检查（粒度、装量、pH值、无菌、微生物）、含量测定等。确实反映和控制了本制剂的质量。