医学硕士论文范文：CXCL12-CXCR4生化学链接在嘴巴内部鳞癌中的表现和作用

前言

口腔癌是头颈部较为常见的恶性肿瘤之一，大部分都属于鳞状细胞癌，与口咽癌一起，位列全身恶性肿瘤的第六位。在一些高发地区，每年新增病例甚至占男性恶性肿瘤的25%。 口腔癌的发病原因很多，主要是颜面部的血供比较丰富，癌细胞易于转移，而且与个人的饮食、生活习惯也有一定的联系。口腔癌易于发生转移的主要原因可能是口腔癌的局部侵袭力强，易于向颈部淋巴结转移，而且颈部淋巴结转移对患者预后影响很大。恶性肿瘤的主要特点就是生长迅速、发展较快、呈浸润性强，瘤细胞蔓延侵入周围组织的间隙、管道、空腔等处，并破坏邻近器官和组织。
大量研究资料证实，特定的趋化因子受体在大部分肿瘤中都会特异性表达并与肿瘤的转移密切相关81。CXCR4分子归属于G蛋白结合受体家族，此家族群在许多药物的药理作用方面起了很重要的作用，已被多个研究证实是其药理作用的靶点。首先CXCR4分子传递外部信息到内部，然后诱导细胞定向转移，同时激活并正确调制机体的免疫系统，否则，CXCR4会加速癌症的恶化和扩散。作为一种趋化因子受体，其与乳腺癌91、前列腺癌[101等恶性肿瘤的生长、侵袭和转移有密切关系，但在口腔癌尤其是舌癌的研究中，报道较少见。趋化因子CXCL12又称基质衍生因子-1 (SDF-1)是小分子的细胞因子，属于趋化因子蛋白家族。它有两种形式，SDF-la/CXCL12a和SDF-ie/CXCL12b.它们是SDF-lmRNA的2种不同的拼接变异体，二者在表达及功能上未发现差别。
趋化因子CXCL12对淋巴细胞有强烈的趋化作用并在发育中起重要作用。在胚胎发育中CXCL12引导造血干细胞从胎儿肝脏到骨髓的迁徙。被敲除CXCL12基因的小鼠，常常在出生后1小时内死亡或直接死于胎中。SDF-la/CXCU2a还可以影响神经元的电生理。CXCL12可以在许多组织（包括脑、心、脾脏、肺、肝、肾、骨髓、胸腺）中表达。CXCR4是趋化因子CXCL12的特异性受体。趋化因子CXCL12与其特异性受体CXR4所构成的XCXL12-CXCR4生物学轴在多种肿瘤的转移中扮演了重要的角色。口腔癌是头颈部常见的恶性肿瘤，严重威胁着人们的生命及健康，晚期口腔癌的根治性治疗术后常常给患者带來很大的创伤，如一些器管功能的丧失、面部畸形等，严重影响其生存和生活质量。
本课题着重研究CXCL12/CXCR4生物学轴对体外培养的舌鳞癌Tca8113生物学活性的影响，从而对口腔癌的治疗新的靶点提供重要的理论依据。目前国内对CXCU2-CXCR4生物学轴在口腔鳞癌中表达的相关性研究报道还不是很多，本实验通过运用免疫组化技术检测趋化因子受体CXCR4在口腔鳞癌组织的表达、Tmnswdl小室法检测舌鳞癌Tca8113细胞的侵袭能力、酶联免疫吸附测定法检测趋化因子CXCL12在不同组织的蛋白表达情况，探讨CXCL12-CXCR4生物学轴在口腔癌的发生、发展过程中的作用，并分析两者之间的内在关联，从而为口腔癌的临床诊断及治疗提供理论依据。

1结果判定
1.1免疫组化
结果判定CXCR4以镜下所见细胞胞质中出现黄褐色颗粒为阳性细胞。使用半定量分析方法，进行综合评分。抗体阳性表达以每张切片不少于3个视野中的细胞内棕黄色颗粒状染色为标准。参照KASE['']定标准，对免疫组化结果进行分析评估。根据表达阳性的细胞在所有组织细胞中占的比例和阳性细胞的染色强度为判定标准：A:按阳性细胞中显色的细胞数记分，<1/3为1分，1/3?2/3为2分，>2/3为3分。B:按细胞显色深浅记分，无阳性反应细胞为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。积分数=A><B。 A><B=0判断为（一），AxB=l2判断为（+ ) ， AxB=3?4判断为（++) , AxB=6?9判断为（+++)。
1.2侵袭实验结果判定染色，棉签擦去未穿膜的细胞，显微镜下细胞计数。
(1)低倍镜下用细胞计数板计数活的细胞总数；(2)用下式计数：细胞浓度（细胞数/ml)=活的细胞数xl04x稀释倍数(3)计数原则：计数时处于压线的细胞，数左不数右，数上不数下。二次重复计算误差不应超过10%。
1.3酶联免疫吸附测定实验结果判定
(1)目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于;)阴性对照；与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。
(2)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。横坐标、纵坐标分别用标准物浓度、OD值表示，绘制标准曲线图（图5)，根据所测样品的OD值，在坐标曲线上査出相应浓度，再乘以样品稀释倍数，即为样品的实际浓度。

2统计学处理运用
spssn.o统计软件进行数据分析。结果以均值±标准差表示，各检测指标之间相关关系用Spearman相关分析。多组定量资料比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),组间比较采用LSD-t检验。检验水准a=0.05为检验水准，P<0.05说明有统计学意义。讨论口腔癌是颌面外科中常见的肿瘤，特别是口腔鱗癌，易于发生转移，发病率居于全世界第六位，可发生于舌、颊、颌骨、牙周组织等任何部位。男性的发生率一般比女性稍高，在发展中国家，口腔癌是一大问题。据统计，中国每年新增加口腔癌约4.56万人，在R常生活中，吸烟和饮酒与口腔癌的发生密切相关121，根据大量资料报道，随着每天吸烟的支数和吸烟的年数的增加，患口腔癌的危险度也会增加，而且随着酒的消耗量口腔癌发生率也会有所增加，同时相关学者研究显示，患口腔癌的风险会随着含漱剂中的酒精含量的增加而增加，尤其在使用含酒精浓度在25%以上的含漱剂治疗口腔白斑，更易使其发生癌变。究其原因，可能主要与口腔癌细胞的快速生长、远处转移等恶性生物学行为以及吸烟、饮酒等影响口腔卫生因素有关。如何对口腔癌进行综合治疗及有效的预后评估一直是口腔癌治疗的难题。口腔癌中一般以鳞状细胞癌多见，其中舌鳞癌（tongue squamous cellcarcinomaTSCC)是口腔常见的恶性肿瘤之一。
多发于舌侧缘、舌背及舌根等处，可分为溃疡型或浸润型，其特点是浸润性强，生长速度快，恶性程度较高。由于舌独特的生理解剖特点，F1常进食、讲话等所需，其机械运动较为频繁，还具有丰富的淋巴管和血液循环，早期多发生颈淋巴结转移，且转移率较高。临床上该肿瘤常易侵袭、破坏周围邻近组织，还可发生远处转移，且预后较差。据不完全统计，口腔癌总的5年生存率为50%-70%，造成这些差别的主要原因可能是早期和晚期的患者所占比例不同所致，其中I期5年生存率可高达90%，而IV期的仅10%左右。因此提高人们对早期口腔癌的认识及口腔癌病人长期生存率的关键是加强宣教，争取早发现、早治疗。口腔癌治疗失败与原发灶的局部复发及远处转移密切相关，有学者针对口腔癌手术结果分析发现，①切缘阳性病例是切缘阴性病列局部复发率的2倍；②手术切缘阳性的比例随着T期的增大亦增高；③术后放疗对切缘阳性病例，有降低局部复发率的趋势，但其局部复发率仍高于手术切缘阴性术后不补加放疗的病例。因此手术前及手术中应该准确估测病灶的范围与深度，做到彻底切除。

目录
前言..................................... 1
材料与方法 ..................................... 3
结果..................................... 12
讨论..................................... 22
结论..................................... 23
参考文献..................................... 27

结论
1.CXCR4在口腔鳞癌组织中高表达，在IH常口腔组织中低表达，可能与其发病有关，可诱导肿瘤的生长分化，并参与肿瘤细胞的侵袭和转移。
2.CXCL12在口腔鳞癌最常见的转移灶的组织中含量较高，其组织匀漿内的细胞穿膜数量也最多，而在其不易转移的组织含量较低，细胞穿膜数量也最少，说明此因子可能趋化表达CXCR4的肿瘤细胞向CXCU2含量高的转移灶作定向移动。
3.CXCL12/CXCR4生物学轴在介导口腔癌转移中具有关键作用，可能参与白细胞浸润、细胞迁移和器官发育等一系列重要的生理和病理过程。但其具体分子机制及表达上调的始动因素，其时空变化如何调控，其与口腔癌转移相关其他趋化因子/趋化因子受体生物学轴的联系，以及CXCL12/CXCR4是否与口腔癌发生相关等问题都需要深入研究。
4.阻断其生物学作用有望成为治疗口腔癌等相关问题的新靶点。

参考文献
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