前 言
一、研究背景
与过去 20 年相比，全球乳腺癌数量上升了 1.4 倍，绝大多数地区的乳腺癌发病率增长了 30%~40%[2]。我国虽是乳腺癌的低发国家，但随着人们生活节奏的加快和社会竞争力的增加，我国乳腺癌发病率也在以 3%~4%的速度逐年上升[3]，并且发病年龄逐渐趋于年轻化[4,5]。据统计，我国每年女性乳腺癌发病数量达 16.9 万，已逐渐取代宫颈癌成为女性恶性肿瘤第一位，我国女性乳腺癌死亡人数约 4.5 万，癌症死亡率已上升至第六位[6]。国际癌症研究机构（InternationalAgency for Research on Cancer, IARC）预计，到 2030 年，我国女性乳腺癌发病数量可达 23.4 万，因乳腺癌死亡人数可达 7.0 万。
随着健康观念的提升和科学技术的发展，乳腺癌的诊疗技术也有了显著的提高，使乳腺癌患者的死亡率下降，生存率增加。目前，临床上常见的乳腺癌治疗方式是在手术治疗的基础上施加放疗、化疗、激素治疗、免疫疗法、中医药治疗等辅助治疗来增加乳腺癌的治愈率。其中，化疗作为一种最常见的辅助治疗手段，能极大提高乳腺癌术后患者的治愈率以及增加患者的生存期，得到最为广泛的应用。化疗药物作为一种细胞毒性药物，能长时间抑制肿瘤的生长和发育，但这种细胞毒性同时对正常细胞也能造成较大程度的损害。因此，在化疗的同时常伴随骨髓抑制、恶心、呕吐、腹泻、便秘、脱发、免疫功能低下、疲乏无力等副作用。其中，疲乏作为患者最常见和持续时间较长的不良反应，已严重影响患者的康复和生活[7]，并且在化疗结束及各种生化指标恢复正常后，这种疲乏感仍会持续很长时间[8]。
研究显示，乳腺癌患者中，有 56%~95%的患者都伴有 CRF 症状，其中约有 20%的乳腺癌患者的疲乏感觉持续到癌症完全治愈后数月至数年[9]。CRF 最早在 1979 年由 Haylock 提出并进行研究[10]，随后在 1996 年首次从护理学角度被定义[11]，认为 CRF 是包括身心疲倦甚至耗竭等各种感受的一种主观的症状，严重干扰患者的日常生活。美国国家综合癌症网（National Comprehensive Cancer Network, NCCN）在 2000 年发布的《癌因性疲乏实践指南》将癌因性疲乏定义为是一种痛苦的、主观的、持续的疲惫感或乏力感，与活动不成比例，与癌症或癌症治疗相关，并常伴有功能障碍[12]。国际疾病分类标准第 10 版（ICD-10）将 CRF 描述为非特异性乏力、虚弱、嗜睡、全身衰退和疲劳[13]。CRF 与正常健康人群经历的疲乏不同，它具有发生快、程度重、能耗大、持续时间长和不能预知等特点，并且不能通过睡眠或休息得到缓解[14]。CRF 对患者及其照顾者在心理、精神、社会、生活等方面都有显著影响，甚至会影响他们对生活的态度及对生命意义的理解，已成为影响治疗和康复的重要因素。
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二、研究目的
振荡运动（Vibration exercise）作为一种新兴的运动方式，在医学和康复领域越来越受到人们的关注。振荡运动采用振荡作为刺激方式，激活肌肉的本体感觉产生反射，使肌肉产生不自主收缩，进而提高肌肉的运动能力[23]。振荡运动还能通过肌肉的收缩和血容量的改变来使呼吸系统的摄氧能力和心血管系统的载氧能力增加，促进机体新陈代谢和调节体液循环并加速血流供应，进而达到改善疲乏，恢复健康的目的[24]。同时，它作为一种较为被动的运动方式，既能满足患者少动的需求，又能达到运动的目的和效果。振荡运动已在改善心血管疾病、预防骨质疏松等慢性疾病的治疗和康复上取得显著成效，但其是否与其他有氧运动一样，能够显著改善乳腺癌患者 CRF 症状，特别是伴有负性情绪的 CRF 还未见报道。
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实验材料与方法
一、材料
（一）实验对象
饲养笼选择塑料制品，并配有不锈钢罩、塑料吸水瓶和铝吸水管，室温（22±2）℃，相对湿度 50%~60%，每日 12h 自然光照，国家标准固体混合饲料喂养，自由饮食，适应性喂养 1 周。本实验经锦州医科大学动物伦理委员会批准。
（二）主要实验试剂
SHZ-88 乳腺癌细胞株 中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心
10%胎牛血清 美国 Gibco 公司
RPMI-1640 培养液 美国Gibco 公司
0.25%胰蛋白酶 美国 Gibco公司
表柔比星 浙江海正药业有限公司
IL-6 试剂盒 上海巧伊生物科技有限公司
IL-1β 试剂盒 上海巧伊生物科技有限公司
TNF-α 试剂盒 上海巧伊生物科技有限公司
3%水合氯醛 锦州医科大学附属第一医院动物实验室
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二、实验方法
（一）技术路线
（二）负性情绪的乳腺癌癌因性疲乏动物模型的建立
1、乳腺癌癌因性疲乏动物模型的建立
（1）乳腺癌细胞的培养
将 SHZ-88 大鼠乳腺癌细胞培养于 RPMI-1640 培养液中（10%胎牛血清、100ug/ml 链霉素和 100U/ml 青霉素），静置在 37℃、5%CO2的培养箱中进行培养，隔日更换 1 次培养液 ，并观察细胞的生长情况。
（2）乳腺癌细胞的接种
先随机抽取 12 只雌鼠设为对照组，不进行任何处理，剩余雌鼠全部接种SHZ-88 细胞。选取处于对数生长期细胞，本实验采用 1×107个细胞/ml，每只0.2ml 的接种量[25]。先将雌鼠待接种部位的皮毛剃除，消毒后将 0.2ml 的 SHZ-88细胞悬液皮下注射到雌鼠腋窝处，并用棉签压迫针眼处 1min，防止悬液漏出。每天观察肿瘤的生长情况，7~10 天左右便可肉眼看见和触及肿块。当肿块增长到直径 0.6~0.8cm 时，判断为乳腺癌细胞接种成功。本实验共有 6 只雌鼠未成瘤，故淘汰。
（3）乳腺癌雌鼠的化疗方案
乳腺癌细胞接种成功后，对荷瘤雌鼠进行化疗。本实验参考乳腺癌实验动物的化疗方案[26,27]，将注射用盐酸表柔比星（EPI）以 2.5mg/kg 的剂量腹腔注射到雌鼠体内，第 1~3 天为第一个疗程，第 10~12 天为第二个疗程，表柔比星的累积剂量达到 15mg/kg。在此阶段共有 3 只雌鼠死亡，故淘汰。此时乳腺癌癌因性疲乏动物模型建立完成。
2、负性情绪刺激及分组
本实验在乳腺癌癌因性疲乏动物模型的基础上施加负性情绪刺激来建立负性情绪的乳腺癌癌因性疲乏动物模型。参考经典的慢性温和刺激法来制备负性情绪[28]。除对照组外，将建立乳腺癌癌因性疲乏动物模型成功的雌鼠再随机分为 4 组：CRF 组、CRF+光照组、CRF+噪音组和 CRF+光照+噪音组，每组 12 只。除 CRF组外，其他三组分别给予光照刺激、噪音刺激、光照联合噪音刺激。光照刺激：将 LED 台灯固定在距离鼠笼 1m 处直接照射雌鼠，除白天自然光线外，每天 21点到次日 9 点给予 12h 持续光照，持续 3 周。噪音刺激：每天 13 点到 15 点用86dB（TES1357 声音测量仪测定）噪音（从 noisemp3.com 上下载，选用不同段噪音，以免雌鼠适应）持续刺激雌鼠 2h，持续 3 周。光照联合噪音刺激：每天白天 13 点到 15 点用 86dB 噪音持续刺激雌鼠 2h，21 点到次日 9 点给予 12h 持续光照，持续 3 周。实验操作时将进行光照刺激和噪音刺激的雌鼠置于其他房间，避免对其他组雌鼠造成干扰。
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三、论文
前言.....................................10
实验材料与方法............................13
实验结果............................17
讨论.....................................23
结论.....................................28
四、本研究创新性的自我评价........................29
五、参考文献........................30
讨 论
一、负性情绪的乳腺癌癌因性疲乏动物模型的建立
乳腺癌 CRF 早在上个世纪 70 年代就已得到研究和关注，随着社会负担和竞争压力的加重，负性情绪对乳腺癌 CRF 的影响也日益增加，绝大多数乳腺癌 CRF患者大多伴有负性情绪且不易缓解，因此，有必要对伴有负性情绪的乳腺癌 CRF症状的治疗及缓解方式进行研究。国内外针对乳腺癌 CRF 以及负性情绪的研究大多以人为研究对象，而以动物为研究对象具有干扰性小、可控性好、结果易获得、容易复制等优点，因此，建立负性情绪的乳腺癌 CRF 动物模型可操作且十分必要。目前，针对负性情绪的乳腺癌 CRF 动物模型制备的参考资料较少，本实验采用在建立乳腺癌 CRF 动物模型的基础上施加负性情绪刺激的方式来制备负性情绪的乳腺癌 CRF 动物模型。
国内外研究大多采用裸鼠来建立乳腺癌动物模型，但由于本实验对实验动物要进行接种细胞瘤、药物化疗、负性情绪刺激和振荡运动干预等一系列操作，加之裸鼠本身对生长环境要求高、不易存活、耐受性差，故本实验选用 SD 雌性大鼠作为实验对象，并且 SD 雌鼠具有体积较大、自身条件较好、易生存等优点，便于实验中的操作和观察。
目前乳腺癌动物模型的制备方式有三种：自发型、诱发型和移植型[33]。自发型和诱导型这两种制备方法的肿瘤发生情况不一致、获得时间较长并且实验耗费较大，而移植型制备方法的周期短、个体差异较小、成本低并且成功率高，故本实验采用移植型方式制备乳腺癌动物模型。移植细胞选用了 SHZ-88 乳腺癌细胞，直接皮下移植到动物身上便可成瘤，操作简单且成瘤率高，易重复操作[25]。乳腺癌化疗方案参考 Zombeck[26]和 Hydock[27]的 CRF 动物模型的化疗方案进行制备。对 CRF 的评价除了观察动物的一般情况，如体重、进食量、饮水量、皮毛色泽、粪便情况、日常活动等外，还包括行为学指标的评定。鼠尾悬挂实验和力竭游泳实验可作为体力疲乏的评价标准，水迷宫实验可作为脑力疲乏的评价标准[34]。本实验选用鼠尾悬挂实验对雌鼠的疲乏情况进行评价，简单可行，准确率高。
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结 论
在研究细胞因子与 CRF 的关系时发现，CRF 症状类似于 IL-1β 和 TNF-α 增加引起的“病态行为”[61]，当机体 IL-1β 和 TNF-α 分泌超出正常浓度时，可出现CRF 症状。炎性因子 IL-1β、TNF-α 能直接作用于下丘脑，相互协同并诱导肝组织产生急性期蛋白反应，影响神经-内分泌系统并引起活动减少，疲劳不适等状态，也可以通过减少皮质醇浓度来干扰下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴功能，改变线粒体形态使 ATP 数量减少，进而导致疲乏和抑郁的产生[62]。叶建增等[63]探究 TGF-β1和 TNF-α 与癌症相关性乏力关系的研究中，将肺癌患者分为疲乏组和无疲乏组并检测癌细胞中的细胞因子，结果表明，疲乏组患者的 TNF-α 等细胞因子的水平明显高于无疲乏组，提示 TNF-α 等细胞因子的高表达能引起 ATP 酶的结构和功能异常，造成全身各系统功能下降，进而导致疲乏的产生。
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参考文献（略）